平板菌落計(jì)數(shù)法步驟

• 更新時(shí)間：2024-11-15
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平板菌落計(jì)數(shù)法是將等測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，其中的微生物充分分散為單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長繁殖而形成的肉眼可見的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。

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平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。但是，由于待測樣品往往不易*分散成單個(gè)細(xì)胞，所以，長成的一個(gè)單菌落也可來自樣品中的2～3或更多個(gè)細(xì)胞。因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果往往偏低。為了清楚地闡述平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(colony-forming units，cfu)而不以菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量。
平板菌落計(jì)數(shù)法雖然操作較繁，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時(shí)間才能取得，而且測定結(jié)果易受多種因素的影響，但是，由于該計(jì)數(shù)方法的優(yōu)點(diǎn)是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗(yàn)(如活菌制劑)，以及食品、飲料和水(包括水源水)等的含菌指數(shù)或污染程度的檢測。


平板菌落計(jì)數(shù)法操作步驟 
1、編號(hào) 
取無菌平皿9套，分別標(biāo)明為10-4、10-5、10-6各三套，另取6支無菌試管分別標(biāo)記為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 
2、稀釋 
用1mL無菌吸管吸取1mL已充分混勻的大腸桿菌菌懸液，精確地放0.5mL至10-1的試管中，此即為10倍稀釋，將多余的菌液放回原菌液中。 
將10-1試管充分振蕩、混勻。另取一支1ml吸管插入10-1試管中來回吹吸菌液三次，進(jìn)一步將菌體分散、混勻。動(dòng)作不要太猛太快，吸時(shí)插入，吹時(shí)提出，再用此吸管吸取10-1菌液1mL，精確地放0.5mL至10-2試管中，此即為100倍稀釋，依次類推， 
3、取樣 
用三支1ml無菌吸定分別吸取10-4、10-5、10-6的稀釋菌懸液各1mL，對號(hào)放入編好號(hào)的無菌平皿中，每個(gè)平皿放0.2mL 
4、倒平板 
盡快向上述盛有不同稀釋菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45度的LB培養(yǎng)基約15-20ml，置水平位置迅速旋動(dòng)平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻。 
5、培養(yǎng) 
倒置于37度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)， 
6、計(jì)數(shù) 
算出同一稀釋度三個(gè)平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算； 每毫升中菌落形成單位（cfu）= 同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×5